Kelebihan maupun kekurangan kalsium dan magnesium dapat menimbulkan permasalahan kesehatan. Metode analisis yang mampu menetapkan kadar kalsium dan magnesium dalam bahan pangan seperti susu sangat diperlukan, namun metode analisis yang telah dikembangkan sebelumnya (spektroskopi serapan atom, dan kolorimetri) masih banyak memiliki kendala diantaranya membutuhkan waktu yang lama. Metode lain yang lebih efektif yaitu spektroskopi derivatif. Penggunaan metode spektroskopi derivatif dapat mendeteksi keduanya secara simultan. Penelitian ini bertujuan untuk mengembangkan metode penetapan kadar kalsium dan magnesium dalam susu sapi secara spektroskopi derivatif.
Jenis penelitian yang digunakan dalam penelitian ini adalah analitik observasional. Pada tahap I, dilakukan optimasi metode meliputi optimasi penambahan reagen, penetapan panjang gelombang dan order derivatif yang digunakan untuk analisis, serta penentuan operating time. Preparasi sampel dilakukan dengan destruksi basah. Pada tahap II, dilakukan validasi metode pada sampel susu sesuai panduan ICH dan USP yang meliputi selektivitas, linearitas, akurasi-presisi, LOD dan LOQ.
Kondisi optimum penetapan kadar kalsiumsusu sapi selektif pada orde derivatif ke 2 lamda 555 nm dengan linearitas Y=3,548.10-7X + 2,478.10-5 (r = 0,9613) dan kondisi optimum penetapan kadar magnesium selektif pada orde derivatif ke 4 lamda 466 nm dengan linearitas Y=3,25.10-9X + 2,15.10-7(r = 0,9814). Nilai recovery kalsium dan magnesium berada pada rentang 84-117% dan 83-114%, nilai RSD berada pada rentang 1,02-4,30% dan 1,07-2,46%, nilai LOD 19,3630 ppm dan 41,4079ppm, nilai LOQ64,5434 ppm dan 138,026 ppm.
Penetapan kadar kalsium dan magnesium dapat dilakukan secara simultan dengan metode spektrofotometri UV-Vis secara derivatif, dan metode tersebut memenuhi persyaratan validasi

Kata Kunci : spektrofotometri UV-Vis derivatif, kalsium, magnesium, susu