Karies adalah masalah kesehatan gigi tertinggi di Indonesia yang merusak jaringan keras gigi. Pencegahan karies dapat dilakukan dengan meningkatkan remineralisasi untuk mengimbangi demineralisasi yang terjadi pada permukaan gigi. Tulang ikan bandeng merupakan limbah industri pengolahan ikan yang mengandung kalsium dan fosfor, yang penting dalam proses remineralisasi email gigi. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh aplikasi substrat tulang ikan bandeng terhadap kekerasan email gigi.
Jenis penelitian ini adalah eksperimental laboratoris dengan pre and post test control group design. Penelitian ini menggunakan 24 sampel gigi premolar rahang atas yang terbagi menjadi 3 kelompok yaitu kelompok perlakuan substrat tulang ikan bandeng konsentrasi 10%, 20%, dan kelompok kontrol. Uji kekerasan email gigi dilakukan menggunakan Micro Hardness Tester ASTM E92. Pengujian kekerasan dilakukan 2 kali yaitu setelah demineralisasi dan setelah perlakuan.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat perbedaan signifikan sebelum dan sesudah aplikasi (p<0,05) dan terdapat perbedaan signifikan perlakuan antar 3 kelompok perlakuan (p<0,05). Peningkatan kekerasan tertinggi terdapat pada kelompok perlakuan substrat tulang ikan bandeng konsentrasi 20% .
Kesimpulan yang diperoleh adalah tulang ikan bandeng berpotensi sebagai agen remineralisasi alami pada gigi.

Kata kunci: tulang ikan bandeng, remineralisasi, kekerasan email, Vickers Hardness Tester.