Kalsium dan magnesium memiliki peran penting dalam tubuh, sehingga pemenuhan kebutuhan asupan keduanya harus dikontrol. Asupan kalsium dan magnesium dapat diperoleh dari ikan teri (Stolephorus spp.). Dibutuhkan metode analisis yang mampu menetapkan kadar kalsium dan magnesium pada ikan teri agar kebutuhan keduanya seimbang. Beberapa metode analisis yang digunakan adalah SSA dan kompleksometri, tetapi pelaksanaannya masih memiliki kelemahan yaitu preparasi sampel yang panjang, mahal, kurang spesifik dan sensitif. Metode spektrofotometri derivatif dapat digunakan untuk mengatasi hal tersebut. Selain lebih sederhana, metode ini lebih murah, cepat, serta dapat meningkatkan sensitivitas. Tujuan penelitian ini adalah mendapatkan metode penetapan kadar kalsium dan magnesium dalam ikan teri yang selektif, peka, teliti, dan akurat.
Jenis Penelitian analitical observasional. Penelitian dilakukan dengan optimasi metode meliputi optimasi pelarut dan reagen, penetapan spektra UV-Vis,  analitik, operating time, dan orde derivatif. Preparasi sampel dilakukan dengan metode destruksi basah. Terakhir dilakukan validasi metode meliputi selektivitas, linearitas, akurasi, presisi, LOD, LOQ dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis dual beam.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kondisi optimum kalsium dan magnesium pada lamda 555 nm orde 2 dan 466 nm orde 4. Hasil validasi kalsium dan magnesium mempunyai nilai (r) 0,9650 dan 0,9892. Nilai recovery kalsium dan magnesium adalah 87,17-100,55% dan 89,74-109,29%, nilai RSD 1,5-4,8% dan 4,35-5,5%, nilai LOD 5,7166 ppm dan 66,6942 ppm, nilai LOQ 19,0555 ppm dan 222,31 ppm, dan keduanya selektif pada lamda 555 nm dan 466 nm.
Kesimpulan yang diambil bahwa penetapan kadar kalsium dan magnesium dalam ikan teri (Stolephorus spp.) secara spektrofotometri derivatif memenuhi persyaratan selektif, peka, teliti, akurat, dan linear.

Kata Kunci : Optimasi metode, validasi metode, spektrofotometri derivatif, kalsium, magnesium, ikan teri (Stolephorus spp.)